Ontwikkeling van 'n indirekte ELISA-metode vir die opsporing van vark-akute diarree-sindroom koronavirus IgG-teenliggaampies gebaseer op rekombinante spykerproteïen

Vark Akute Diarree Sindroom Coronavirus (SADS-CoV) is 'n nuut ontdekte vark enteriese patogeniese koronavirus wat waterige diarree by pasgebore varkies kan veroorsaak en aansienlike ekonomiese verliese vir die varkbedryf kan veroorsaak.Tans is daar geen geskikte serologiese metode om die doeltreffendheid van SADS-CoV-infeksie en entstof te evalueer nie, so daar is 'n dringende behoefte om 'n doeltreffende ensiem-gekoppelde immunosorbent-toets (ELISA) te gebruik om vir hierdie tekort te vergoed.Hier is 'n rekombinante plasmied wat SADS-CoV piek (S) proteïen uitdruk, saamgesmelt met menslike IgG Fc domein, gekonstrueer om rekombinante baculovirus te produseer en uitgedruk in HEK 293F selle.Die S-Fc-proteïen word gesuiwer met proteïen G-hars en behou die reaktiwiteit met anti-menslike Fc en anti-SADS-CoV teenliggaampies.Daarna is S-Fc-proteïen gebruik om indirekte ELISA (S-iELISA) te ontwikkel en die reaksietoestande van S-iELISA te optimaliseer.As gevolg hiervan, deur die OD450nm-waarde van 40 SADS-CoV-negatiewe sera te analiseer, bevestig deur immunofluoressensietoets (IFA) en Western blotting, is die afsnywaarde bepaal as 0,3711.Die variasiekoëffisiënt (CV) van die 6 SADS-CoV positiewe sera binne en tussen lopies van S-iELISA was almal minder as 10%.Die kruisreaktiwiteitstoets het getoon dat S-iELISA geen kruisreaktiwiteit met ander varkvirussera het nie.Daarbenewens, gebaseer op die opsporing van 111 kliniese serummonsters, was die algehele toevalsyfer van IFA en S-iELISA 97,3%.Die virusneutralisasietoets met 7 verskillende OD450nm-waardes van serum het getoon dat die OD450nm-waarde wat deur S-iELISA opgespoor is, positief gekorreleer is met die virusneutralisasietoets.Laastens is S-iELISA op 300 varkplaas serummonsters uitgevoer.Kommersiële stelle van ander vark enterovirusse het getoon dat die IgG positiewe koerse van SADS-CoV, TGEV, PDCoV en PEDV onderskeidelik 81.7%, 54% en 65.3% was., 6%, onderskeidelik.Die resultate toon dat die S-iELISA spesifiek, sensitief en reproduseerbaar is en gebruik kan word om SADS-CoV-infeksie in die varkbedryf op te spoor.Hierdie artikel word deur kopiereg beskerm.alle regte voorbehou.